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    任选式自动生化分析仪分析参数设置原则
    双击自动滚屏 发布者:admin        发布时间:2009/6/18        阅读:10999

    任选式自动生化分析仪分析参数设置原则

    山西亚森实业有限公司  郭永红

    著名仪器公司自己生产常用项目试剂盒、定标液(定值血清型标准液)与定值质控血清,提供30种左右常用项目的分析参数,供用户直接使用。另外还有数十个空白项目参数表,由用户自己开发新项目。有的公司自己不提供试剂盒,但有合作的试剂公司,由合作试剂公司提供分析参数。因此,在购买仪器时必须购买一定数量指定试剂公司的试剂盒(包括定标液与定值质控血清)。小型仪器公司既不生产试剂盒,也没有合作试剂公司,分析参数表是空的,需要用户自己设计分析参数,因此难度很大。不过国内代理商一般提供他们的设计参数,往往个别参数不恰当,用户自己应逐条核实。

    1.最好使用厂家的原装参数

    11原装分析参数不应修改,仅计量单位要选用我国法定单位。用原公司指定的试剂盒、定标液与定值质控血清作室内质量控制,除非分析仪没有调试好或有故障,一般能一次通过。

    12不同公司的定标液在定值时所用原始标准的来源不同,其定值可以稍有差异。方法学相同的试剂盒配方也有差异,所以其它公司的定标液或用水剂标准液作仪器定标,使用非指定试剂盒作质控,测得的数值与质控血清的的预计值会有差异,这种情况不表示原装分析参数不合适。

    13国产试剂盒的产品质量已大有提高,可选择方法学相同的优质国产试剂盒与原公司指定试剂盒作并行检测,实验样品应包括低值和高值,结果作相关分析。符合要求的可以使用。少数项目的方法学没有符合要求的国产试剂盒,只有另行安排该项目的国产试剂分析参数。但原参数要保留或备份,等待合格的国产试剂盒出现。

    14不论用原公司或国产试剂盒,原分析参数不应随意修改,尤其是主要参数;如血清试剂比(包括稀释水量)、孵育时间、延迟时间、检测时间,因为这些参数一旦改变,线性范围和各种限额参数都将发生改变,严重影响测定结果的准确性。

    15双试剂两步法的方法学有很多优点,如果分析仪为双试剂式,最好用双试剂两步法。

    16底物耗尽参数不能删去,否则高浓度结果出现低值;线性范围如果删去,高浓度结果也会偏低;试剂吸光度上下限如被删去,分析仪将接受变质试剂。

    2.设计分析参数的原则

    如果仪器公司不提供分析参数或测定项目的方法学不同,可以自己设置分析参数。主要设计以下几个参数。

    样本试剂比例。                         计算因子。

    孵育时间。                              耗尽限额。

    延迟时间。                              线性度。

    监测时间。                            线性范围。

    试剂吸光度上下限。

    以上这些参数试剂盒说明书一般都会提供,可按此填入分析参数表,定标后即可进行日常工作,有些参数在以后的工作中逐步修正。

    3.检测试剂合理有序排列,能减少探针携带误差,提高检测结果的准确度

    3.1  终点反应 

    311PH值改变:反应物之间,反应物缓冲液之间因携带误差而使pH值改变,反应达不到终点。如双缩脲法测血清总蛋白,若其他条件相同,反应在碱性(pH89)条件时,蛋白肽键(—CONH)才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应,完全测出血清蛋白的总量。若pH8时,总蛋白测定结果偏低,直接影响球蛋白、白蛋白/球蛋白的结果。

    312缓冲液混入反应物:磷酸盐缓冲液混入无机磷试剂,会使检测结果偏高。应将含有磷酸盐缓冲液的检测项目放于无机磷后检测。如GOD-POP法测GLU

    3.2 速率法反应 

    3.2.1辅酶结构:辅酶参与反应时,其还原型、氧化型在340nm处曲线变化是相悖的,由携带误差使上升反应或下降反应不彻底,导致无效值出现。

    3.2.2最适pH值:酶活力测定在最适pH值时,反应最快,灵敏度最高,但是因为缓冲能力有限,可因携带误差使酶促反应出现无效值。大多数酶反应pH值在6.07.5之间;ALPγ-GTLDH须在碱性条件下最适宜。

    3.2.3 反应物间的作用 

    3.2.3.1CK检测不应在ALPCa检测之间,因CK反应液中加入EDTA-Na,能抑制ALP活性,结合Ca而使结果偏低。

    3232ALTAST反应液中均含有LDH,可干扰LDH检测结果。

    3233Cho,Glu,UA,HBDHPBS缓冲液,干扰无机磷测定。

    3234BUN酶法测定因谷氨酸脱氢酶(GLDH)消耗NADH,不易放在底物NADHALTAST项目前检测。

    3235同时测定一个项目的不同标本(血、尿、脑脊液等):应将不同标本放入不同通道测定。临床生化检测应注重试剂的合理排序,严格按规程操作,及时清除试剂瓶口处结晶,以免导致试剂水平检测错误;对于稳定性差的试剂尽量减少与空气接触面积;有沉淀、变浑浊及颜色异常改变的试剂及时更换,尽量清除无效值,提高生化检测的实效性;为临床诊断发挥其应有的作用。

    4一般先做孵育时间长的终点法,后做监测时间短的速率法,以便恒速打印综合报告单。

     

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